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岛津原子力显微镜——iPS细胞与癌细胞的对比与区分

时间:2022-7-27 阅读:65

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干细胞的研究一直受制于供体细胞很难获得,而且相关实验的伦理风险也不容忽视。因此2007年发明的诱导式多能性干细胞(iPS)技术成为*佳的胚胎干细胞替代。iPS细胞在形态、基因和蛋白表达、表观遗传修饰状态、细胞倍增能力、类胚体和畸形瘤生成能力、分化能力等方面都与胚胎干细胞相似。但是iPS转化过程中,会有一定的几率发展为癌细胞。不同体细胞来源的iPS细胞成瘤性有差异。因此,如何筛选安全型iPS细胞是该技术能够进入临床实验的关键。

 

原子力显微镜作为一种三维形貌观察工具,不仅具备超高分辨率,而且支持在液体环境下工作,是一种理想的细胞观测设备。除了形貌观察外,原子力显微镜还可以多种表面属性进行定量观测。例如,基于力学测试的表面机械性能测试。这些特征为原子力显微镜应用于iPS细胞观测与筛选提供了技术基础。

 

为此设计一个实验,分别用原子力显微镜观察未分化的iPS细胞和HeLa细胞。HeLa细胞是一种被广泛使用的癌变细胞,因此可以和iPS细胞进行对比观察。

 

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上图显示了SPM形状图像(a)HeLa细胞和(b)iPS细胞。用光学显微镜观察到的相应相位差图像分别显示在(c)和(d)中。图中箭头所示位置处的截面形状轮廓如(e)和(f)所示。

 

从细胞形态上来看,HeLa细胞呈圆顶形,表面隆起比较高,约7um;而iPS细胞呈扁平状且细胞间粘附呈网状结构,细胞高约1.7um。仔细观察细胞之间的边界,可以看出HeLa细胞之间的边界呈凹陷状,而iPS细胞之间的边界是凸起的,而且呈网络状。据此可分析得知这两种细胞各自的间粘附具有差异,且HeLa细胞之间的粘附较弱,而iPS细胞之间的粘附较强。

 

除了形貌观察外,原子力显微镜还可以通过力学测量获得细胞表面的机械性能。如下图所示,用探针针尖压触细胞表面,通过对探针获得的力反馈分析样品各类机械性能。

 

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对于本实验,在对64×64点的测量区域进行测量后,从获取的体数据中形成形状图像。该观察中使用的探针是由OlympusCorporation制造的OMCL-TR800PSA并且具有0.15N/m的弹簧常数。测量是在培养液中的活细胞条件下进行的。对细胞的最终压力(排斥力)为2.5nN。通过比较从探针与样品接触的位置到达到2.5nN的力的变化,确定样品的硬度。

 

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(a)和(b)显示了SPM观察到的HeLa和iPS细胞的细胞形状图像,(c)和(d)显示了相应的ZX断面图像,是从样品竖截面方向看时在(a)和(b)中箭头所示的X线位置处施加到探针的力的图像。图中上方为测量起点,下方白色虚线为压触终点,显示了样品截面形状轮廓。

 

ZX图像中,探针与样品接触后检测到力的位置以黄色到红色的颜色显示。因为这表明探针对细胞的变形,所以可以理解较大量的细胞变形显示细胞的较软部分。可以从细胞变形量了解硬度。(c)中的HeLa细胞显示出均匀的变形,但相比之下,在(d)中的iPS细胞中,细胞体较软,细胞间粘附区较硬。

 

分析结果表明,HeLa细胞表面硬度比较均匀,软硬部分差别不大,而iPS细胞主体较软,细胞间粘附区较硬。

 

由以上测试可知,利用原子力显微镜对iPS细胞进行表征,有潜力发展为正常细胞筛选以及剔除癌变细胞的合适工具。

 

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本文内容非商业广告,仅供专业人士参考。

 

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